C57BL/6

1. 实验材料

1.1实验动物

选择C57BL/6J无菌小鼠，8-10周龄，体质量20-25g，按体重随机分组，对照组13只，高血压组12只，5只/盒饲养于无菌包中，温度( 22±2) ℃，湿度50%～60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水。

1.2人类粪便样本

受试者拟参与样本采集和信息采集一次，排除消化系统其它器质性疾病、消化道进行过手术者，排除有酗酒史、糖尿病、癌症、肾衰、中风等其它影响肠道菌群的疾病者，排除取样前3~4周服用处方药、益生菌、抗生素、非甾体类药物者。

将SBP＜120mmHg，DBP＜80mmHg，生化指标正常，年龄、性别和BMI等协变量与高血压组匹配的健康志愿者，作为对照组；将高血压患者作为高血压组。采集受试者新鲜粪便，按照使用说明书用粪便微生物基因组保护液套装采集后存储-80℃，离心取上清液作为粪便移植液。

2.实验方法

2.1动物模型制备

将健康对照组和高血压组人类粪便移植液，以400ul/天，连续三天经口灌胃，接种无菌小鼠，得到菌群移植小鼠。移植周期为10周，饲养在隔离环境内。

2.2标本采集及处理

实验期间每周称量小鼠体重，每周记录进食量、进水量，每2周取粪便进行16S rRNA测定。在10周时，对照组和高血压组小鼠分别检测血压（无创尾套法或有创植入式）和心脏超声。三溴乙醇腹腔注射麻醉，腹主静脉采血至死亡。全血EDTA抗凝，室温静置30 min后，3,000 rpm，4°C离心15 min分离血清，-80℃冰箱冻存。

采集心脏、主动脉（从主动脉弓到腹主动脉）、主动脉窦、腹主动脉、肾脏、小肠、结肠样本，4%多聚甲醛固定，后续石蜡包埋进行HE染色；剩余部分提取蛋白和RNA，-80℃冰箱冻存进行后续检测。肠道内容物和血清，-80℃冻存，进行血生化与代谢组学检测分析。

1.血压及超声结果

菌群移植10周后，检测血压和心脏超声，取材；血压及超声结果显示与对照组相比，高血压组小鼠SBP和DBP均显著增加，IVS明显增厚，LVPWs有一定增加趋势。

2.心脏及主动脉石蜡切片病理染色

菌群移植10周后，病理结果显示与对照组相比，高血压组小鼠心脏血管周纤维化增加，主动脉血管中膜增厚以及管壁纤维化加重。

3.脾脏流式免疫细胞检测

与对照组相比，高血压组小鼠CD4T细胞显著增加。

4.血清炎症因子检测

与对照组相比，高血压移植组小鼠炎症因子IL-1β、TNFα、IFNγ显著增加。

5.肠道微生物群分析

（1）肠道微生物群多样性

与对照组相比，高血压组小鼠肠道微生物群的alpha多样性（Shannon、Simpson、Pielou和Goods_Coverage指数）显著降低。

分别基于ASV处Bray-Curtis、jaccard、unweighted_unifrac和weighted_unifrac距离的主坐标分析（PCoA）评分图证明了两组间微生物区系β-多样性存在显著的组成差异。

（2）菌群相对丰度

与对照组相比，高血压组中Clostridium_sensu_stricto_1和Flavonifractor的相对丰度较低，而Escherichia_Shigella、Ruminococcus_gravus、Terrisporobacter和Morganella的相对丰度较高。

6.血清非靶向代谢组学分析

非靶向代谢组学识别血清样本中关键代谢物和代谢途径的潜在改变。PCA、PLS-DA及OPLS-DA多元统计分析结果显示，两组间代谢物特征均差明显。

高血压组与对照组进行比较，共发现了36个显著上调的代谢物和16个显著下调的代谢物。