C57BL/6小鼠

1.实验材料

1.1实验动物

选择无特定病原体（SPF）级C57BL/6J小鼠，8-10周龄，体质量20-25g，按体重随机分组，对照组14只，肥胖组12只，5只/盒饲养于SPF 级屏障系统中，温度( 22±2) ℃，湿度50%～60%，12 h循环照明，小鼠自由摄取食、水。

1.2人类粪便样本

受试者拟参与样本采集和信息采集一次，排除消化系统其它器质性疾病、消化道进行过手术者，排除有酗酒史、糖尿病、癌症、肾衰、中风等其它影响肠道菌群的疾病者，排除取样前4周服用益生菌、抗生素、非甾体类药物者。

将BMI值在18.5-23.9 kg/m2范围内，生化指标正常的健康志愿者，作为对照组；将BMI值≥28.0kg/m2的肥胖者作为肥胖组。采集受试者新鲜粪便，按照使用说明书用粪便微生物基因组保护液套装采集后存储于-80℃，离心取上清液作为粪便移植液。

2.实验方法

2.1动物模型制备

将健康对照组和肥胖组人类粪便移植液，以400ul/天，连续三天经口灌胃，接种无菌小鼠，得到菌群移植小鼠。移植周期为10周，饲养在隔离环境内。

2.2标本采集及处理

实验期间每周称量小鼠体重，每周记录进食量、进水量，每2周取粪便进行16SRNA测定。实验结束后，对照组和肥胖组小鼠量体长、腹围。三溴乙醇腹腔注射麻醉，腹主静脉采血至死亡。全血EDTA抗凝，室温静置30 min后，3,000 rpm，4°C离心15 min分离血清，-80℃冰箱冻存。

解剖小鼠腹腔，PBS心脏灌流，取心、肝、脾、肺、肾和脂肪（睾丸、肾周围、腹股沟和背部脂肪），滤纸吸干后称重、拍照。脾脏进行免疫学检测，心、肝、肺、肾部分组织福尔马林固定，后续石蜡包埋进行HE染色；剩余部分提取蛋白和RNA，-80℃冰箱冻存进行后续检测。脂肪组织冰冻切片包埋剂包埋并切片，进行油红O染色。

模型表型数据：

1.体重及摄食量结果分析

经正常体重与肥胖人群肠道菌群移植小鼠体重无显著差异，但在移植第五周，肥胖组摄食量显著低于正常组，并持续至第九周。

2.脂肪含量

肥胖组小鼠棕色脂肪质量表现出降低的趋势，白色脂肪质量表现出增加的趋势。

3.脂肪组织HE染色

与正常对照组比较，肥胖组棕色脂肪细胞数量减少，米色脂肪细胞数量也呈现降低趋势，白色脂肪细胞面积增加。

4.血脂水平检测

血脂检测结果提示与对照组相比，肥胖组血脂水平及游离脂肪酸水平升高。

5.血糖变化

两组血糖无显著差异，但肥胖组与对照组相比胰岛素水平显著降低。

6.脂肪组织产热相关基因表达

qPCR检测棕色脂肪和白色脂肪组织产热相关基因，肥胖组中产热基因下调/有下调趋势。

7.脂肪组织炎症因子表达

qPCR检测棕色脂肪炎症基因，肥胖组中炎症基因表达上调。

1.代谢组学分析

人与小鼠血浆代谢组数据分析显示，肥胖组与正常组之间的代谢谱差异显著。

人与小鼠代谢组学KEGG共同下调的通路，其中产热通路下调。

人与小鼠代谢组学KEGG上调的通路与甘油磷脂代谢，氨基酸代谢以及亚油酸代谢有关。