SD大鼠

针对线粒体DNA G7755位点构建DdCBE载体，并结合Cre/loxP系统，构建能够Cre诱导的DdCBE系统，并利用CRISPR/Cas9系统将可诱导的DdCBE系统敲入大鼠的Rosa26位点，建立mt.G7755A条件突变大鼠。通过与神经元特异性Cre工具鼠杂交，建立神经元特异性mt.G7755A突变大鼠模型。

图1. 建立mt.G7755A条件突变大鼠 A. 利用CRISPR/Cas9将mt.G7755A条件突变载体敲入大鼠Rosa26位点；B. 基因敲入基因型鉴定结果；C. 基因敲入Sanger测序结果。

图2. 利用NeuN-cre大鼠杂交实现神经元特异性mtDNA G7755A点突变 A. 利用NeuN-Cre工具鼠实现神经元特异性mtDNA G7755A点突变示意图；B. mtDNA G7755A神经元特异性点突变大鼠组织中LoxP剪切PCR结果；C. mtDNA G7755A神经元特异性点突变大鼠脑组织LSL剪接Sanger测序峰图；D. mtDNA G7755A神经元特异性点突变大鼠各组织G7755A点突变的检测结果。

1.神经特异性mt.G7755A突变大鼠在3周时开始出现体重降低，并逐渐表现出运动共济失调，在1.5月时出现渐进性的后肢瘫痪。

图1. 神经特异性mt.G7755A突变大鼠模型表型分析。A.不同性别神经特异性mt.G7755A突变大鼠体重变化曲线；B.神经特异性mt.G7755A突变大鼠生存曲线；C.神经特异性mt.G7755A突变大鼠疾病进程图；D.1.5月龄神经特异性mt.G7755A突变大鼠CT图片；E.1.5月龄神经特异性mt.G7755A突变大鼠照片；F.1.5月龄神经特异性mt.G7755A突变大鼠不同节段髓腔体积统计。

2.神经特异性mt.G7755A突变大鼠出现运动功能损伤，但学习记忆功能不受影响。

图2. 神经特异性mt.G7755A突变大鼠行为学实验。A.抓力实验；B.转棒实验；C.步态实验示意图；D.步态实验；E.悬尾实验；F.phenotyper实验；G.Y迷宫实验；H.旷场实验。